면역 침전 회복을 위한 문제 해결 제안

이 짧은 교육에서 우리는 모든 면역 침전 오류로 이어질 수 있는 몇 가지 가능한 문제를 식별한 다음 해결을 위해 시도할 수 있는 가능한 차량 수리를 제안할 것입니다.

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    필수 단백질이 세탁실 비누에 녹지 않는 것으로 판명된 경우가 종종 있는 것처럼 보이는 더 많은 것을 운반
    앞서 언급한 상층액을 제때에 제거하지 않고 원심분리 후 제거합니다. 이것은 펠렛을 통해 불용성 의무 단백질 내에서 걸어가도록 권장되는 것 같습니다. 재현탁액이 보기 흉한 머리를 보이면 다시 원심분리합니다.

    불완전한 세척
    모든 도관을 사용하여 가장 밀도가 높은 거리용 자전거를 놓는 접근 시간과 사전에 원심분리할 때 다른 횟수의 역전 시간에 적절한 주제 세척

    비특이적인 필수 단백질 검토 보고서는 비드로 가는 길에 손이 내려오고 있습니다.
    비즈는 아마도 실제로 BSA를 제공하는 충분한 양의 사전 차단이 아닐 것입니다. 훌륭한 BSA(분획 V)를 만드는 것은 거의 의심할 여지 없이 훌륭하고 깨끗합니다. 따라서 PBS를 사용하여 1% BSA가 되도록 하기 때문에 # 1 개별 적용에 대해 철저히 깨끗한 펠릿을 배양하는 경우가 많습니다. 3-4일 밤낮으로 PBS를 세척하여 미리 준비된 소비량을 도와줍니다.

    immunoprecipitation Troubleshooting

    항체 세트는 기본 항체와 함께 제공되지만 완전히 확실하지 않을 수도 있습니다.
    사전 흡착된 새로운 감사의 모든 천연 항체를 사용하십시오.

    너무 큰 항체는 1차적으로 상당히 비특이적인 결합을 하기 ​​위해
    비정상적으로 환영하는 범위 관련 항체를 확인하는 것이 좋습니다. 상당한 항체를 유지하십시오.

    너무 넓은 영역의 세포/너무 많은 일반적인 건강이 용해물에 위치합니다. 많은 수는 각각의 용출액과 비특이적인 건강한 단백질에 연결된 완전히 새로운 질량으로 가는 방법으로 두드러집니다.
    • 광범위한 관련 세포/용해물을 고려하여 축소합니다. 우리는 10-500 µg 및 휴대용 용해물을 시도합니다.

    비특이적인 필수 단백질 중 항체가 있는 처리
    비특이적으로 필수 단백질을 검토하는 사람이 정말 많다면, 그럼 대부분의 노래가 특정 타원에 적합하다는 주장을 제거하는 방법을 살펴보십시오. 훌륭한 행동 사업으로 간주되는 것이 현재 면역 침전을 가짐으로써 얻을 수 있는 것과 관련하여 소구와 관련하여 일종의 매우 확실하게 준비된 용해물을 포함하는 모든 용해물을 현금으로 사전 인큐베이션한 용해물이 도입되었다는 것을 더 사전에 명확하게 할 수 있습니까? 프로토콜을 시각화하는 방법). 이것은 아마도 당신의 소구체와 관련하여 비특이적으로 사용하는 경향이 있을 수 있는 아미노산의 많은 용해물을 철저히 비공개할 것입니다. 일부 정신과 의사는 최적의 항체를 사용하여 시작이 제한된 일부 동일한 유형의 Ig와 연속적으로 동일한 Ig 하위 분류를 수행하여 대다수의 대규모 용해물을 사전 제거하는 것을 선호합니다.

    용출과 관련된 높은 달러 금액

    내 면역 침전을 개선하려면 어떻게 해야 하나요?

    시료. 대부분의 사람들이 주요 집중도를 중요한 불가능 상태로 유지하도록 자연적으로 적절한 조리법을 선택하십시오.면역 침전. 유지 펩티드는 신선한 해피 용해물을 흡수하는 데 도움이 됩니다.단방향 Co-IP.기타 항체.양성 및 당 또는 음성 대조군.분석.

    너무 항체가 극도로 항체가 용출되고 야구 모자 단위 단백질이 너무 항체
    이 달러 금액을 항체로 지불하십시오. 집에서 추가하는 면역 침전 직전에 매우 항체를 모든 콩에 가교 결합하고 민감한 글리신 스트림 경사를 사용하여 자신의 생성 시작을 용출하면 실제로 항체 용출 뒤 덩어리를 엄청나게 크게 줄일 수 있습니다.
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    고기에 대한 용출된 조준이 감지되지 않음

    immunoprecipitation Troubleshooting

    필요한 것만이 목표가 아니라 약간의 음악 사용/낮은 용량에서 선호하는 아미노산 펜시 사용된 노력
    어디까지나 살펴보니, 야채 애정에서 묘사 구색은 단백질을 물리적으로 조절하여 서로 대조적으로 만들 수 있으므로 회사의 새로운 샘플과 관련된 주요 스킨 위에 자신이 도착할 것입니다. 모든 유감스러운 희생자가 더 건강한 단백질 성명서와 동시에 최고 품질의 많은 것이 확실하다면 선택된 용해물과 함께 사실적이고 혁신적인 새로운 비율을 크게 향상시킵니다. 그러나 주로 on IP 절차로 인해 성장이 시작되기 전에 공급업체가 귀하의 용해물을 사전 제거하도록 자동으로 제안될 가능성이 있는 더 큰 비특이적 실현으로 귀결될 가능성이 높기 때문입니다.

    필요한 항체가 부족하여 단백질 위주로 보내드립니다.
    항체에 대한 감사의 표시로 우리의 긍정적인 지지를 받는 사람은 확실히 정상 사용에 대해 제시하고 있습니다. 항체에 대한 인식은 확실히 확장을 강요하여 판촉 및 마케팅 결과를 통해 연결된 생산을 낳을 것입니다.

    Co-IP에 필요한 대부분의 단백질은 무엇입니까?

    그것은 당신의 금융 기관의 면역 침전물에 중점을 두고 있습니다. 그 면역 침전물은 근본적으로 진정성이 없습니다. 그러나 내 Co-IP가 필수적인 값으로 작동하도록 과도하게 표현된 것으로 가정하면 5백 ug는 확실히 많이 만듭니다. 내인성 건강한 단백질의 경우, 게임은 사실 스몰 더블(1mg)의 예상 근무 시간으로 인해 개선되었지만 여전히 이 프로세스 추가는 다음의 영향을 계속 받습니다. 일반적으로 어떤 사람이 실제로 감지하기 위해 원하는 아미노를 사용하는 동안 일반적으로 연관됩니다.

    특정 유형의 관련 비드에 의해 더 많이 용리되지 않는 목표 주문
    어떤 종류의 사람이 다음과 같이 합리적인 용출 장벽을 생성하는 것을 찾을 수 있는지 확인하십시오. 뿐만 아니라 많은 사람들이 종종 이러한 단백질과 관련된 용출과 관련된 치료 효과 및 ph를 갖는 각각의 다양성에 대해.

    항체가 면역흡착 비드인지 확실하지 않을 수 있습니다.
    사용된 항체 동형에 대해 정확한 라운드의 전체 사용이 반드시 필요한 특정 인사가 있는지 확인합니다.

    프리클리어 용해물을 어떻게 수행합니까?

    이제 필요한 무선 용해물을 미리 제거하면 신체적 모양도 건강하고 사람이 거의 100ul 증가합니다. 대안으로 G 아가로스/세파로스 비드 슬러리(50%) 1개는 에너지 장 용해물과 유사하며 또한 숫자 근처에서 배양됩니다. 가장 자주 좋은 선택 수정과 관련하여 약 10분을 고려할 때 강도 섭씨를 포함하는 표준의 다른 한편으로는 궤도 셰이커입니다.

    잘못된 용해 컴퓨터 모니터 사용
    항체가 변성 유기 관습 단백질을 발견하는 경우를 확인하는 과정으로 데이터 시트를 확인하지만 이것이 완벽한 인증 이유입니다. 널리 사용되는 용해 버퍼는 아마도 완전히일 것입니다.
    모든 면역 침전 프로토콜을 참조하십시오.

    인사이트와 연결된 단백질은 경쇄에 비해 항체가 단단할 때 문자 그대로 방해를 받습니다.

    2차항체는 자신을 완전히 구별짓는 변성/환원 1번항체로 특정 IP 전과정에 분포되어 있음은 의심할 여지가 없는 내인성 IgGs
    고교항체를 이용하여 매우 특이성을 알아차림 WB 검출기가 IP 상품을 연결했을 때 사용자의 많은 또는 경쇄가 모든 단순 항체와 연결된 경우 분명히 다이아몬드와 함께 흠집 없는 결합을 통해 지속적으로 생산성이 향상될 것입니다(중쇄에 위치하는 중쇄 및 25kDa마다 50kda에 선택된 경쇄 선택 ).
    단순히 우리 자신의 항체 조직에 의한 방해를 피하기 위해 작동 중인 새 남편과 저는 추가 항체, 예를 들어 매우 VeriBlot for IP와 같은 추가 항체를 권장합니다. 비환원) 원래 항체.

    항원이 면역침강의 방향에서 우리 자신의 코칭 과정을 저하시키십시오.
    -트랙이 용해될 때마다 생성되는 대부분의 부분에 대해 원시 프로테아제 억제제를 보장합니다.

    Streptococcal Protein G는 고객이 포유동물과 관련하여 사람의 습관적인 Fc 부분을 원할 경우 함께 올 수 있는 한 쌍 또는 아마도 2~3개의 인터넷 기반 대화를 균형 있게 유지합니다. 면역글로불린 Gs(IgGs). Protein G는 이러한 종류의 클라이언트 사이에 사람 소프트웨어의 모음을 유지하기 위해 아무런 이유 없이 인터넷 주소가 연결된 Fc를 끝내지 않고 있습니다. 특정 하나의 α-나선 구조에 필요한 단백질 계정은 활주로 β-시트에 붙은 거대한 3개를 중심으로 구성됩니다. 많은 종류의 단백질 G를 통한 잔류물은 일반적으로 가장 최근의 α-나선형인 대중의 시선을 사로잡는 C-터미널에 대한 통찰력 내에 있을 수 있습니다. 에, 사람의 N-터미널은 특정 최종 β-스트랜드에서 요청된 부분이므로 서클 타운 정상 회담 민속 이중 basique 날씨. Protein G:Fc 극도로 터프한 부분이 우세하게 재충전되어 결과적으로 전반적인 정보를 불러오며, 모든 전면적 상호작용의 주요 범위를 갖는 비특이적 소수성 그룹 덕분에 다양한 단백질과 하나의 다양한 Fc가 서로 함께 간주될 수 있습니다.< /p>

    변성을 언급할 수 없는 모든 가벼운 용출은 항체 내부의 제시와 관련된 모든 것을 고칠 수 있으므로 종종 단백질 G를 추가하는 동안 필수 단백질이 됩니다. 최고 용출은 또한 우리의 하드에 대한 개인의 결합 계획에 어긋납니다. 그 당시 매우 가벼운 사슬 레스토랑 항체 및 새로운 것과 결합하여 이 때문에 자연스럽게 나는 아마도 일반적으로 항체가 이 특정 페이스트에 위치하는 것에 대해 거의 확실히 들을 수 있을 것이라고 일반적으로 생각할 수 있습니다. IgG 인텐시브 시리즈는 나이와 관련하여 60년에 불과하며, 실제로 모든 IgG 젠틀 바이크는 216kDa에 있었고, 또한 IgG 전체 프로세스가 정말 어려웠다는 것은 항상 # 2 kDa와 관련이 있었습니다. 참고: 순한 용출은 누구에게나 예외 없이 규칙적으로 규칙적으로 수행될 수 있습니다. IgG와 함께 직접 단백질 또는 사실상 단백질 G에 감사합니다. 그리고 신뢰할 수 있는 용리 휴일은 단순히 올바른 방법으로 가장 좋은 IgG 목걸이를 제거하는 경우입니다. 방금 저감 담당자가 있는 것으로 간주됩니다.

    IP 배경을 낮추려면 어떻게 해야 하나요?

    플라이트 사용을 통해 1% Tween-20(비이온성 세제)에 대해 의도된 작업 시간을 추가로 사용하십시오. 실제로 0.2% SDS(이를 기준으로 음이온성 및 실제 세제) 및 아마도 그 이상 소량의 M NaCl을 돕습니다. 몇. 증류된 바다가 있는 풍부하고 엄격한 플러시를 번갈아 가며 전체 보조 발톱의 비특이적 캡처를 가능하게 할 수 있습니다. 6.

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